定量PCR检测乙肝病毒DNA实验中变性温度和时间的影响

摘要

目的 探讨PCR仪温度特性及变性温度、变性时间对实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒的影响.方法 分析比较变性温度范围为88℃-97℃,变性时间分别为5 s和40 s,退火和延伸60℃,40 s,循环数40的实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒的效果.结果 变性温度超过97℃或者变性时间超过40 s.检测到的DNA的量明显降低;变性时间小于20 s,模板含量较低的样本难以检出.结论 变性初期或退火初期PCK温度与程序设置温度偏差较大;变性时间不应超过95℃,否则,检测到的DNA数量将显著降低;变性时间不应小于20 s或超过40 s,否则容易导致假阴性.