Smad4基因转染对结肠癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路的影响

摘要

目的 探讨Smad4基因对人结肠癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 将Smad4真核表达质粒以脂质体介导方法转染结肠癌SW480细胞,G418筛选稳定表达株,TOPFLASH/FOPFLASH双荧光素酶报告基因方法检测转染前后SW480细胞中Wnt信号通路活性,并检测Wnt通路关键调节因子β-catenin及通路下游Claudin-1蛋白的表达变化,免疫荧光细胞化学法观察β-catenin在SW480细胞中的分布变化.结果 成功构建Smad4稳定表达的结肠癌细胞模型,转染组Wnt通路信号活性较转染前明显降低,Smad4重建能降低β-catenin mRNA及蛋白表达水平,并导致β-catenin发生自胞浆、胞核向胞膜的转位,同时能降低Claudin-1的蛋白表达水平.结论 Smad4基因能抑制结肠癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路的活性,提示Smad4除了参与经典的TGF-β信号通路外,还可能通过Wnt信号途径发挥肿瘤抑制作用.