乙型脑炎病毒PrM蛋白原核表达及单克隆抗体制备

摘要

目的 表达和纯化乙型脑炎病毒PrM基因的融合蛋白,制备PrM融合蛋白的鼠源性单克隆抗体(pAb).方法 根据GenBank数据库中乙型脑炎病毒PrM氨基酸序列获得其对应的基因序列,对PrM全长基因(80 aa)进行体外合成,将其克隆至pET-21原核表达载体,构建重组表达质粒pET21-PrM;将阳性重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,通过镍离子亲和层析纯化目的蛋白;纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,获取单克隆抗体并利用Protein A Sepharose柱进行纯化,ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性.结果 成功构建了pET-21-PrM原核表达载体,0.5 mmol/L PTG 30℃培养6h,原核蛋白PrM蛋白以包涵体形式在大肠杆菌得到高水平表达,通过复性与亲和层析获得纯度在90％以上的PrM蛋白,蛋白浓度为600 mg/L,制备的抗PrM单抗效价高达1∶1.6×106,Western blot鉴定其具有良好的特异性.结论 获得高纯度乙型脑炎病毒PrM蛋白,并制备特异性单克隆抗体,将为进一步研究乙型脑炎病毒的生物学功能提供实验基础.