靶向转纳米组织型纤溶酶原激活物基因预防兔动脉支架血栓的形成

摘要

目的 观察构建的白蛋白纳米组织型纤溶酶原激活物(t-PA)基因超声微泡靶向载体体内转染兔髂动脉预防支架内血栓形成和再狭窄的效果.方法 用球囊导管剥脱兔髂动脉内皮并安置裸金属支架,制备血管支架内血栓形成和血管内膜增生模型.构建高表达t-PA基因质粒,制备载t-PA基因白蛋白纳米粒,实现与白蛋白超声微泡连接成的超声靶向转基因载体.在超声场作用下(1 MHz,1.5 W/cm2,6 min)实现t-PA基因靶向转染支架血管.用多克隆抗t-PA抗体间接免疫组织化学法检测血管壁和周围组织t-PA表达.术后1、2、4和8周取静脉血检测t-PA和D-二聚体(D-dimer)含量的变化.常规病理观察支架血管血栓形成.形态测量法测量血管内膜厚度和面积,判断内膜增生.用抗增殖细胞核抗原(PCNA)单克隆抗体免疫组织化学法检测平滑肌细胞表达的PCNA,判断其增殖状态.结果 靶向转基因后可见局部血管壁和周围组织表达t-PA抗原,并伴静脉血t-PA和D-dimer含量增加,有效预防支架内血栓形成和血管内膜增生.结论 超声靶向转白蛋白纳米t-PA基因获得支架血管壁和周围组织t-PA有效表达,成功地预防支架内血栓形成和血管再狭窄,为人冠状动脉支架术预防血栓形成提供实验基础.