通用模板实时PCR法对YMDD突变的检测

摘要

目的：本研究旨在建立一种快速准确的方法，用于乙肝患者拉米夫定治疗过程中的耐药突变的检测与监控。方法：通过运用通用模板和Taqman探针，我们建立了一种用于检测YMDD突变的实时PCR的方法，通过I反应，V反应，和对照组的C反应，可以检测到YIDD，YVDD突变，以及HBV的总量。当ΔCt <3.5时，即可确认突变存在。含有乙肝病毒聚合酶基因YMDD变异株的质粒经过梯度稀释，并进行检测验证。本研究对163例接受拉米夫定治疗的乙肝患者血清样本采用这种方法进行检测，结果与DNA测序法一致。结果：检测范围可至103拷贝/ml，并且可以排除非特异性扩增。在163例样本中，有51例可以检测到耐药突变。结论：这种通用模板实时PCR方法对于接受拉米夫定治疗乙肝患者的YMDD突变的定量是快速准确的，可以用于拉米夫定治疗前以及治疗过程中耐药突变的监控。