宽谱大肠杆菌O157∶H7 CVCC4050噬菌体vB_EcoM_GXBP08的分离鉴定及特性分析

摘要

【目的】探究宽谱大肠杆菌O157∶H7噬菌体的生物学特性和全基因组特征。【方法】采用双层琼脂平板法从广西南宁某猪场污水样品中分离宽谱大肠杆菌O157∶H7裂解性噬菌体,通过空斑试验、噬斑试验对噬菌体进行宿主谱和裂解效价的测定;利用透射电镜观察、最佳感染复数测定、一步生长曲线测定、热稳定性与酸碱稳定性评估、杀菌试验及全基因组测序的方法分析噬菌体的形态学、生物学和全基因组特征。【结果】试验成功分离1株宽谱大肠杆菌O157∶H7裂解性噬菌体,命名为vB_EcoM_GXBP08。噬菌体vB_EcoM_GXBP08能高效裂解14株大肠杆菌,裂解效价可达10^(9)~10^(10)PFU/mL。以大肠杆菌O157∶H7 CVCC4050为宿主菌测得噬菌体的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1。一步生长曲线显示,该噬菌体的潜伏期和爆发期分别为20和50 min,爆发量为154 PFU/cell,耐受温度范围为30~70℃,在pH为4.0~10.0的环境中能维持其活性。在宿主菌CVCC4050中的杀菌试验结果显示,MOI为1时噬菌体vB_EcoM_GXBP08具有良好的杀菌效果。根据透射电镜观察和全基因组序列分析,该噬菌体属于有尾噬菌体目肌尾噬菌体科T4-like噬菌体属,基因组片段总长为108114 bp,GC含量为36.23%。噬菌体vB_EcoM_GXBP08基因组中含有8个CDS,编码与噬菌体裂解有关的蛋白,未发现与抗生素耐药性、毒力因子、毒素和溶源性相关的基因。【结论】噬菌体vB_EcoM_GXBP08宿主谱宽、效价高,且温度、酸碱稳定性良好,在液体培养基中的杀菌能力强,本研究结果为后续研制宽谱噬菌体制剂以及在食品业、养殖业防治大肠杆菌O157∶H7感染中的应用提供参考。