抗体和酶标记物的不同组合对孕酮酶联免疫吸附试验的影响

摘要

在类固醇的免疫测定中,抗体和酶标抗原正确组合的筛选决定ELISA的灵敏度和特异性。有报道称,采用异源系统法制备针对孕酮不同部位的抗体,可更好地检测孕酮。分别针对孕酮11α-半戊二酸酯-BSA(P-11-HG-BSA)、孕酮11α-半琥珀酸酯-BSA(P-11-HS-BSA)、孕-3-O-羧甲基肟-BSA(P-3-CMO-BSA)和孕酮-3-O-羧甲基肟-OVA(P-3-CMO-OVA)4个不同抗体与酶标记的P-11-HG、P-11-HS、孕酮11α-羧甲基醚(P-11-CME)、P-3-CMO、17-羟-3-O-羧甲基肟(17-P-3-CMO)和孕酮4-羧甲基硫醚(P-4-CMTE)组合进行检测。这些是用青霉素酶、碱性磷酸酶(ALP)和辣根过氧化物酶(HRP)不同标记的。当抗针对P-11-HS-BSA的抗体与分别标记有青霉素酶、碱性磷酸酶和HRP的P-3-CMO进行检测时,酶的类型对该测定法的性能无影响。研究发现,使用P-3-CMO-OVA作为免疫原和P-3-CMO-HRP作为标记的同源检测法,以及抗P-11-HS-BSA的抗体与P-3-CMO-HRP结合的异源ELISA法可灵敏地测定孕酮。使用17α-羟基孕酮-3-O-羧甲基肟-HRP与抗P-3-CMO-BSA和P-11-HS-BSA的相同抗体也被证明比P-3-CMO-HRP更好。结果表明,ELISA的灵敏度和特异性很大程度上依赖于所制备抗体的性质,而酶标记的选择可被控制。