猪Stra8基因的克隆及表达特性分析

摘要

Stra8是一个减数分裂前特异表达基因。试验采用逆转录PCR和RACE法扩增、克隆了猪Stra8基因全序列,并对该序列进行了生物信息学分析;采用半定量PCR法对Stra8基因在成年梅山公猪的睾丸、马尾附睾、附睾体、附睾、精囊、前列腺、尿道球腺,以及公猪和母猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、下丘脑、垂体、大脑、小脑、海马等组织中的表达进行了检测;使用Real-time PCR分析了Stra8在2、30、60、90和150日龄梅山公猪睾丸中的表达模式;构建了Stra8基因的真核表达载体,并转染了NIH-3T3细胞和第3代猪精原干细胞,进行体外培养,并对不同时间点马尾附睾中的睾丸重量和精子数量进行评估。结果表明,猪Stra8基因cDNA全长1444bp,编码366个氨基酸,含有1个典型的螺旋-环-螺旋(HLH)域。Stra8基因在猪睾丸中特异性表达,并首次在2日龄的公猪睾丸中检测到表达量,且随着年龄和体重增加其表达水平显著升高(P<0.05)。用真核表达载体EGFP(增强型绿色荧光蛋白)-N1-pStra8转染NIH-3T3细胞和猪精原干细胞,结果发现其在NIH-3T3细胞胞质中表达,而在精原干细胞中,Stra8主要在细胞质和几个核中表达。以上结果表明,Stra8可能作为一种转录因子启动成年公猪的减数分裂。