猪δ冠状病毒HeN10株的分离鉴定及致病性研究

摘要

本研究旨在获得猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)地方分离株,并对其生物学特性和致病性进行初步研究.使用猪睾丸(ST)细胞分离来自河南某猪场PDCoV阳性病料中的病毒,并通过观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)、反转录PCR、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)、电镜观察、S基因序列分析等方法进行鉴定,同时评价分离毒株在仔猪上的致病性.结果 显示,阳性病料接种ST细胞后,病毒稳定增殖并连续传代至第10代;自第4代开始,感染细胞发生CPE,呈圆缩、拉网、碎裂、脱落状态;IFA鉴定为PDCoV阳性,且电镜观察可见带有刺突的冠状病毒粒子.将分离到的PDCoV命名为HeN 10,其S基因序列与中国SD株相似性最高,达99.8％,与国内报道毒株CHN-JS-2017株和CHN-HeB1-2017株等处于同一分支.将HeN10株以5×106.3 TCID50/头的剂量口服感染5头10日龄健康易感仔猪,可导致所有感染仔猪发生水样腹泻.本研究成功分离了PDCoV HeN10株,其与SD株等国内流行毒株处于同一分支,攻毒后可引起仔猪典型腹泻症状,可为下一步诊断方法及疫苗相关研究奠定一定的基础.