猪源牛病毒性腹泻病毒JLS-01株的分离鉴定及致病性研究

摘要

为了解猪源牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的分子特征及致病性,本研究利用RT-PCR从吉林省某猪场出现严重腹泻症状的仔猪病料中检测到BVDV核酸阳性,将处理后的BVDV阳性样品接种于MDBK细胞,分离到1株病毒,命名为BVDV JLS-01.通过免疫荧光检测、5′UTR与Npro RT-PCR扩增对其分子进化特征进行分析.结果显示,该分离毒株在MDBK细胞上盲传至8代未出现细胞病变,在免疫荧光试验中呈阳性荧光信号.RT-PCR扩增获得大小分别为280和735 bp的5′UTR和Npro片段.BVDV JLS-01株5′UTR与Npro序列遗传进化分析表明,其与LN-1和ZM-95亲缘性最近,与牛源毒株LN-1基因同源性达99.3％,提示该毒株可能来源于牛源毒株.将BVDV JLS-01株F8代细胞培养液人工感染BVDV和猪瘟病毒(CSFV)抗体阴性猪,感染猪未表现出明显的体温升高,但白细胞数量下降,并在感染猪的白细胞提取物中分离到该毒株,表明该毒株具有一定的致病性.该毒株的成功分离对进一步开展BVDV流行病学调查及致病机理等方面的研究具有重要意义.