豫西脂尾羊CIDEa基因的克隆、序列分析与组织表达

摘要

试验旨在对豫西脂尾羊诱导细胞凋亡DNA片段化因子45样效应因子A(cell death-inducing DNA fragmentation factor 45-like effectors A,CIDEa)基因进行克隆及生物信息学分析,并检测其在豫西脂尾羊不同组织中的表达.以豫西脂尾羊脂肪组织RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增并克隆豫西脂尾羊CIDEa基因完整CDS区序列,对测序结果进行了相关生物信息学分析,并对CIDEa基因在豫西脂尾羊心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、瘤胃、小肠、背最长肌、皮下和内脏脂肪组织中的表达进行了分析.结果 显示,豫西脂尾羊CIDEa基因CDS区序列长660 bp,编码219个氨基酸;豫西脂尾羊与绵羊、水牛、黄牛、藏羚羊、猪和人的CIDEa基因同源性分别为99.1％、96.8％、96.2％、98.8％、85.0％和79.4％.蛋白理化性质分析表明,CIDEa蛋白分子质量为24.38 ku,理论等电点(pI)为9.12,属于碱性蛋白.跨膜结构和信号肽预测分析表明,CIDEa蛋白不含跨膜结构和信号肽.亚细胞定位分析表明,豫西脂尾羊CIDEa蛋白分布在细胞质(47.8％)、线粒体(26.1％)、细胞核(17.4％)、液泡(4.3％)和内质网(4.3％).蛋白质三级结构预测发现,CIDEa蛋白结构具有2个α-螺旋、4个β-折叠及一些无规则卷曲.实时荧光定量PCR结果表明,CIDEa基因在豫西脂尾羊脂肪组织(皮下和内脏脂肪组织)中表达量较高,其他组织中表达量从高到低依次为小肠、肝脏、脾脏、瘤胃、心脏、肾脏、肺脏、背最长肌.这些结果可为进一步研究CIDEa基因在肉羊脂质代谢中的功能及羊肉品质调控提供基础资料.