马皮肤成纤维细胞的体外培养与冷冻保存

摘要

本研究利用小组织块直接培养法得到了成年马皮肤成纤维细胞的原代培养物,再用酶消化法处理,能够纯化马皮肤成纤维细胞.成纤维细胞的冷冻保存,首先采用手工冷冻法,选用含有不同浓度保护剂如:二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)、甘油(GC))和新生牛血清(NCS)的12种冷冻液对马皮肤成纤维细胞进行冷冻保存;其次用2种冷冻方法对马皮肤成纤维细胞进行冷冻保存,以24 h贴壁率评价冻存效果.结果表明,10% DMSO和20% NCS的DMEM冻存液,对马皮肤成纤维细胞的冻存效果好(24 h贴壁率84.98%).从冷冻方法来看,程序冷冻法(86.32%)优于手工冷冻法(79.98%)(P＜0.05).