牛乳腺β-酪蛋白基因的克隆及其表达载体的构建

摘要

利用高保真PCR法,分别扩增了牛乳腺β-酪蛋白基因的1.8和1.1 kh的5'和3'调控序列,将其分别克隆入TA载体.经PCR验证后测序,用NCBI Blast软件分析表明其克隆片断与奶牛β-酪蛋白基因相应区域同源性分别为97.0%和99.0%,表明成功克隆了酪蛋白基因5'和3'的调控区.然后利用DNA重组技术依次亚克隆人改造过的真核表达载体pcDNA3(切除CMV启动子),构建成牛乳腺特异表达载体.获得的重组载体经限制性内切酶酶切鉴定,测序验证等表明,成功构建了牛乳腺特异表达载体.