ICSI受精卵胞质注射生产转基因猪胚胎的初步研究

摘要

试验旨在探讨单精子胞浆内注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)法生产猪体外受精卵和应用猪ICSI受精卵进行胞质注射生产转基因胚胎的可行性.首先对比了猪体外受精(in vitro fertilization,IVF)受精卵与ICSI受精卵的胚胎发育效率;然后观察了猪ICSI受精卵的双原核形成时间及效率,对精子注射到胞质后6～18 h分6个时间段进行地衣红染色,对比精子进入卵胞质后的状态及原核形成;最后对猪IVF受精卵受精后8～10 h及ICSI受精卵受精后12～14 h进行EGFP-N1质粒(20 ng/μL)胞质注射,观察胚胎发育效率及转基因效率.结果表明,ICSI受精卵的胚胎发育率(卵裂率89.4％和67.9％、囊胚率36.5％和16.1％)显著优于IVF组(P＜0.05),适合用于猪的体外受精卵试验;猪ICSI受精卵双原核在精子注射到卵胞质后12～14 h形成,双原核形成率为54.90％,显著高于其余5个试验组(P＜0.05);ICSI受精卵胞质注射组胚胎卵裂率(86.2％和66.3％)、囊胚率(30.0％和13.6％)及转基因效率(18.5％和0)均显著高于IVF受精卵胞质注射试验组(P＜0.05).本试验结果为采用ICSI受精卵进行胞质注射生产转基因猪的研究奠定了基础.