猪血凝性脑脊髓炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

摘要

为建立一种快速、准确、常规的猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)检测方法,根据PHEV N蛋白基因序列,设计1对引物和1条探针,建立了PHEV实时荧光RT-PCR检测方法.该方法特异性好,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应;用阳性质粒Puc57-PHEVn评估其敏感性,发现检测下限达10-6 ng/μL(224拷贝/μL).采集233份发病猪组织样品进行临床检测,发现该方法与巢式RT-PCR的符合率达98.3％,准确筛查出巢式RT-PCR并测序阳性的样品14份,且检出率高于巢式RT-PCR.结果表明,本方法敏感、特异,可用于PHEV临床样品的检测.