贝类派琴虫原位杂交检测方法的建立与应用

摘要

本研究选择派琴虫特异性引物PerkITS85和PerkITS750的PCR扩增产物进行地高辛标记制备探针,探索建立了派琴虫的组织切片原位杂交检测方法,并应用该方法检测我国黄海海域采集的贝类样品.研究结果表明,PerkITS85和PerkITS750的PCR扩增产物大小为673bp,利用随机引物扩增法制备的派琴虫地高辛标记探针特异性好,与包纳米虫和尼氏单孢子虫均无交叉反应.以世界动物卫生组织(OIE)推荐的瑞氏液体羟基乙酸盐(RFTM)培养法为金标准对本研究建立的原位杂交检测方法进行评价,其诊断敏感性(Dse)为90.9％,诊断特异性(Dsp)为100％.实际检测应用表明本研究所建立的派琴虫原位杂交检测方法是一种有效的派琴虫检测方法,可以应用于派琴虫病的检测.