细胞色素b_5　Glu44、Glu56的定点突变和蛋白质结构比较

摘要

用寡聚核苷酸定点突变的方法将牛肝细胞色素ｂ５基因（编码亲水结构域８２个残基）上第４４位和５６位谷氨酸的密码子ＧＡＡ变成丙氨酸的密码子ＧＣＴ，获得突变体Ｅ４４Ａ、Ｅ５６Ａ和Ｅ４４／５６Ａ的基因。将它们分别克隆于ｐＵＣ１９上，转化大肠杆菌ＪＭ８３后，突变基因得到成功的表达。将含细胞色素ｂ５及其突变体基因的大肠杆菌发酵，酶法裂解细菌，依次用硫酸铵沉淀法、离子交换柱层析、凝胶柱层析进行分离纯化蛋白。用Ｃｈｏｕ－Ｆａｓｍａｎ法、紫外可见光谱、圆二色谱研究蛋白质，发现定点突变细胞色素ｂ５表面上这２个氨基酸残基对蛋白质的局部二级结构无明显影响。