神经红蛋白突变体(F28Y,F106Y)的构建、表达与表征

摘要

构建了神经红蛋白F28Y,F106Y的两种突变体,并进行了表达、纯化和谱学表征.电喷雾质谱表明突变体蛋白的分子量与理论值一致.氧化型和还原型F28Y及F106Y的紫外-可见吸收光谱与野生型相似,仅氧化型F28Y的Soret 带有2 nm的蓝移,说明这两种突变体蛋白仍保持六配位形式.F28Y的荧光最大发射峰明显红移(340 nm→347 nm),表明其荧光基团更加暴露于极性环境中.圆二色光谱表明,突变体蛋白的α-螺旋含量降低且F28Y产生了β-折叠,这是由于F28相对于F106则位于疏水腔外部且更加接近于溶剂表面所致.热稳定性顺序为NGB>F28Y>F106Y,F106Y最不稳定,是因为其与血红素间存在着较强的疏水作用,突变使F106与血红素间的作用力减弱,从而导致血红素在热变性条件下更容易从蛋白中解离出来.