鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法的建立

摘要

根据鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)核蛋白N编码基因的序列设计特异引物,以病毒全基因组RNA为模板,通过对反应条件进行优化,成功建立了SVCV的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法.结果表明,本方法可在64℃下1h内实现目标核酸区段的大量扩增,扩增产物经凝胶电泳呈现梯形条带,反应体系中添加SYBR GreenI荧光染料后,绿色阳性结果明显区别于橙色阴性结果.该检测体系具有极高的特异性,只能检测到目标病毒,与草鱼呼肠孤病毒(GCRV)和斑点叉尾鮰呼肠孤病毒(CCRV)无交叉反应,其灵敏度比RT-PCR高100倍.本研究建立的检测方法灵敏度及特异性高,且不需要昂贵仪器设备,为快速检测鲤春病毒血症病毒与诊断鲤春病毒血症提供了简捷快速的技术手段.