逆转录

摘要： 为了增加工程集胞藻PCC 6803的乙醇合成产量,通过选用强启动子Pcpc560 驱动并提高外源乙醇合成基因(pdc,yqhD)的表达,从而促进乙醇的生产。具体方法利用同源双交换引入来源于运动型发酵单胞菌的丙酮酸脱羧酶基因(pdc)与来源于大肠杆菌的NADPH依赖型醛还原酶基因(yqhD)并选用不同的启动子来驱动其表达。通过逆转录定量PCR分析,比较在不同启动子驱动的情况下,外源乙醇合成基因(pdc,yqhD)的表达情况并检测相应突变株的乙醇产量。结果显示相较于中等启动子,铜离子诱导启动子PpetE,来源于集胞藻PCC 6803的光强启动子Pcpc560显著促进了外源乙醇合成基因(pdc,yqhD)的表达,并增加了工程菌株乙醇合成的产量。超强启动子Pcpc560搭配pdc,yqhD的组合表达,显著提高了工程菌株的乙醇合成产量。

摘要： 结合高中生物学知识点介绍新冠疫情核酸检测的原理与步骤,分析检测结果出现“假阳性”和“假阴性”的可能原因,进一步拓宽了高中生物学知识和理论在生命健康和医学领域的应用,对高中生物学教学具有一定的参考价值。

摘要： 新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)核酸检测试剂盒中酶的性能对检测效果有决定性作用.为探索逆转录酶和DNA聚合酶性能的快速评价方法,采用常用SARS-CoV-2核酸检测试剂盒,以SARS-CoV-2核酸标准物质为考察依据,对试剂盒中逆转录酶、DNA聚合酶的技术性能进行综合评价研究.第一步,通过分析cDNA产物与目标RNA浓度比值,考察逆转录酶的逆转录效率;第二步,以相同的cDNA为目标样品,进行实时荧光定量PCR分析;第三步,以新冠病毒RNA标准物质为目标样品,进行逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR),比较试剂盒的扩增效率;第四步,考察试剂盒中酶的热稳定性.结果显示,所考察的试剂盒产品逆转录酶的逆转录效率为6.5％～80.7％,DNA聚合酶的扩增效率为90.4％～119.7％,而总体逆转录PCR的扩增效率为90.7％～102.4％.热稳定性评价结果显示,初始较好的酶活性可能在保存和运输期间发生质量变化.通过反映目前新冠病毒核酸检测试剂盒中酶的质量水平,以期对相关质控工作提供一定参考.

摘要： mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(A3G)属于固有免疫家族成员,具有胞嘧啶脱氨酶活性,能通过与核衣壳蛋白基因(Gag)或病毒RNA的核衣壳(NC)域的相互作用包装入子代病毒.在人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)逆转录过程中,A3G使胞嘧啶脱氨基,在DNA负链中引入尿嘧啶,导致病毒的过度突变,发挥抗病毒作用.除此之外,A3G通过包装成病毒粒子发挥抗HIV-1的作用.HIV-1的辅助调节蛋白病毒感染因子(Vif)可以通过泛素-蛋白酶体系统来拮抗A3G的抑制HIV-1的作用.因此,上调A3G的表达或是抑制Vif对A3 G的拮抗作用可能成为HIV-1感染治疗的新有效方法.

摘要： 生物界形形色色,生机勃勃,这些生命现象背后的本质是什么?自从1957年克里克揭开其面纱并提出中心法则后,人们方认识到遗传信息的传递,决定着生物的形态结构、行为生理、繁殖遗传等生命现象。后经科学家补充新的发现,形成了有“DNA复制”“转录”“翻译”和“逆转录”“RNA复制”五种过程的中心法则。

摘要： 在蛋白水平和核酸水平考察醛糖还原酶AKR1B1在肺癌细胞和肺细胞表达差异,研究醛糖还原酶AKR1B1肺癌的相关性.通过分子生物学手段,原核表达AKR1B1重组蛋白,制备AKR1B1小鼠多克隆抗体.利用ELISA、RT-PCR技术,检测肺细胞MRC-5和肺癌细胞A549的表达差异.AKR1B1蛋白原核表达的最适条件为:IPTG浓度1mmol/L,诱导时间24h,诱导温度为16°C时,蛋白含量达到1.9mg/ml.小鼠多克隆抗体,效价为1:32000.醛糖还原酶AKR1B1在蛋白质水平上肺细胞与肺癌细胞的比例为1:3;核酸水平上肺细胞与肺癌细胞的比例为1:4.1.成功表达醛糖还原酶AKR1B1,在肺癌细胞中蛋白质与核酸表达量均比肺细胞中高,预示醛糖还原酶AKR1B1可能是肺癌标记物或者是作为治疗的药物靶点,本实验为肺癌的诊断及治疗提供实验依据及理论基础.

摘要： 目的:建立并应用太子参中芜菁花叶病毒的检测技术.方法:采用RT-PCR技术,设计特定引物从太子参病株中的不同部位扩增特定片段,并且进行序列分析和比对.结果:序列比对结果表明,扩增得到的片段为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因序列片段,本研究建立了一种简便可靠太子参中芜菁花叶病毒的检测方法,并且从太子参根、茎、叶和花中均检测到病毒目标序列.

摘要： 目的:建立并应用太子参中芜菁花叶病毒的检测技术.方法:采用RT-PCR技术,设计特定引物从太子参病株中的不同部位扩增特定片段,并且进行序列分析和比对.结果:序列比对结果表明,扩增得到的片段为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因序列片段,本研究建立了一种简便可靠太子参中芜菁花叶病毒的检测方法,并且从太子参根、茎、叶和花中均检测到病毒目标序列.

摘要： 目的:建立并应用太子参中芜菁花叶病毒的检测技术.方法:采用RT-PCR技术,设计特定引物从太子参病株中的不同部位扩增特定片段,并且进行序列分析和比对.结果:序列比对结果表明,扩增得到的片段为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因序列片段,本研究建立了一种简便可靠太子参中芜菁花叶病毒的检测方法,并且从太子参根、茎、叶和花中均检测到病毒目标序列.

摘要： 目的:建立并应用太子参中芜菁花叶病毒的检测技术.方法:采用RT-PCR技术,设计特定引物从太子参病株中的不同部位扩增特定片段,并且进行序列分析和比对.结果:序列比对结果表明,扩增得到的片段为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因序列片段,本研究建立了一种简便可靠太子参中芜菁花叶病毒的检测方法,并且从太子参根、茎、叶和花中均检测到病毒目标序列.

摘要： 建立了多重RT-PCR同时检测甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,ScYLV)和高粱花叶病毒病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)的技术体系,该体系可有效地对甘蔗田间植株和试管苗进行检测.根据引物之间的互补性及引物的Tm值筛选多重PCR引物.确定适宜的PCR缓冲液的浓度为1×,退火温度为53°C,延伸温度为72°C.

摘要： 建立了多重RT-PCR同时检测甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,ScYLV)和高粱花叶病毒病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)的技术体系,该体系可有效地对甘蔗田间植株和试管苗进行检测.根据引物之间的互补性及引物的Tm值筛选多重PCR引物.确定适宜的PCR缓冲液的浓度为1×,退火温度为53°C,延伸温度为72°C.

摘要： 建立了多重RT-PCR同时检测甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,ScYLV)和高粱花叶病毒病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)的技术体系,该体系可有效地对甘蔗田间植株和试管苗进行检测.根据引物之间的互补性及引物的Tm值筛选多重PCR引物.确定适宜的PCR缓冲液的浓度为1×,退火温度为53°C,延伸温度为72°C.

摘要： 建立了多重RT-PCR同时检测甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,ScYLV)和高粱花叶病毒病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)的技术体系,该体系可有效地对甘蔗田间植株和试管苗进行检测.根据引物之间的互补性及引物的Tm值筛选多重PCR引物.确定适宜的PCR缓冲液的浓度为1×,退火温度为53°C,延伸温度为72°C.

摘要： 建立了多重RT-PCR同时检测甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,ScYLV)和高粱花叶病毒病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)的技术体系,该体系可有效地对甘蔗田间植株和试管苗进行检测.根据引物之间的互补性及引物的Tm值筛选多重PCR引物.确定适宜的PCR缓冲液的浓度为1×,退火温度为53°C,延伸温度为72°C.

摘要： 建立了多重RT-PCR同时检测甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,ScYLV)和高粱花叶病毒病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)的技术体系,该体系可有效地对甘蔗田间植株和试管苗进行检测.根据引物之间的互补性及引物的Tm值筛选多重PCR引物.确定适宜的PCR缓冲液的浓度为1×,退火温度为53°C,延伸温度为72°C.

摘要： 本申请涉及用于增强逆转录酶(RT)活性和/或减少RT被抑制剂(例如福尔马林、单宁酸和/或肝素)抑制的组合物和方法。在一些实施方式中，通过向包含聚合酶的反应混合物中添加谷氨酸钾、组氨酸盐酸盐一水化物、泊洛沙姆188或其任意组合，以减少RT抑制。在其他实施方式中，通过向反应混合物中添加聚乙烯磺酸钠盐(PVSA)来增强RT。本申请还提供了用于目标序列的逆转录及其增强的寡核苷酸引物。这些引物具有高GC含量或低GC含量。还提供了在具有RNA模板和RT的组合物中使用RT抑制减少剂或RT增强剂改进RT产量、RT敏感性或RT对各种化学品的耐受性的方法。

摘要： 本发明提供了一种逆转录酶及逆转录检测试剂，具体地，本发明构建了逆转录酶(M‑MLV)突变库，通过大量筛选，最终筛选出了热稳定性提高且扩增效率较高的逆转录酶突变体，进而提供了包含本发明的逆转录酶突变体的逆转录检测试剂。

摘要： 本发明提供了逆转录酶突变体及逆转录方法，具体地，本发明构建了逆转录酶(M‑MLV)突变库，通过逐步筛选，最终筛选出了热稳定性提高且扩增效率较高的突变体，进而提供了使用该逆转录酶突变体的高效逆转录方法。

摘要： 本发明提供了具有高逆转录效率的耐高温逆转录酶突变体及其应用，具体地，本发明构建了逆转录酶(M‑MLV)突变库，通过逐步筛选，最终筛选出了热稳定性提高且扩增效率较高的突变体(逆转录酶突变体Mu_38)。在高温条件下(58°C)，与野生型相比，本发明的逆转录酶突变体Mu_38的逆转录效率提高了22.47倍。

摘要： 本发明提供了高逆转录效率的逆转录酶突变体，具体地，本发明构建了逆转录酶(M‑MLV)突变库，通过逐步筛选，最终筛选出了热稳定性提高且扩增效率较高的突变体(逆转录酶突变体Mu_26)。在高温条件下(58°C)，与野生型相比，本发明的逆转录酶突变体Mu_26的逆转录效率提高了442.64倍。

摘要： 本发明提供了一种具有高逆转录效率的耐高温逆转录酶突变体及其应用，具体地，本发明构建了逆转录酶(M‑MLV)突变库，通过逐步筛选，最终筛选出了热稳定性提高且扩增效率较高的突变体(逆转录酶突变体Mu_40)。在高温条件下(58°C)，与野生型相比，本发明的逆转录酶突变体Mu_40的逆转录效率提高了46.52倍。

摘要： 本发明提供了泊洛沙姆在提高逆转录酶效率或提高逆转录酶抑制剂耐受性中的应用，以及以泊洛沙姆为核心成分配制的用于逆转录过程中的添加剂混合物。这种添加剂混合物不仅能够提高正常高纯度RNA样本的逆转录产物（约8倍），对复杂来源RNA样本如FFPE RNA或含甲醛、乙醇、盐酸胍、异硫氰酸胍、肝素、鞣酸、甲酰胺和苯酚等逆转录抑制剂的RNA具有更强的耐受和更高的cDNA产量。这种逆转录酶添加物组合可以在RT‑qPCR检测和RNA NGS建库上显著提高复杂来源病理学样本检测的灵敏度和准确性，非常适用于疾病快速诊断领域。

摘要： 本发明公开一种逆转录病毒原病毒序列在逆转录病毒疫苗设计中的应用，针对特定个体或特定人群感染的原病毒序列，设计亚单位疫苗、灭活疫苗、减活疫苗、重组疫苗和核酸疫苗等。能够直接激活人体免疫系统产生特异性抗患者所携带逆转录病毒的抗体，既回避了流行中逆转录病毒病毒株耐药的痼疾，又特异性靶向患者所携带逆转录病毒毒株。由于逆转录病毒感染者所携带的原病毒序列是整合入人体基因组的DNA序列，它相较于其他感染形式中的RNA序列具有高度保守性，故据此应用设计开发的疫苗具有更强的特异性，是克服目前逆转录病毒疫苗研发瓶颈的一个候选者，具有更好的应用前景。

摘要： 本发明涉及一种逆转录方法、逆转录试剂盒及其应用，所述的逆转录试剂盒包含NP‑40裂解液或碱裂解试剂；所述的裂解试剂为NP‑40裂解液，所述的NP‑40裂解液配方为：RNase‑Free H

摘要： 本发明涉及一种用于热启动逆转录反应的组合物，和包括相同物质的用于逆转录PCR的组合物。更特别地涉及一种通过在单个反应管中向水溶液添加焦磷酸酯和焦磷酸酶而获得的反应组合物，所述水溶液含有反应缓冲液、MgCl