异烟肼通过ROS/Caspase-3信号通路诱导L-02细胞凋亡及槲皮素的保护作用

摘要

目的:探讨ROS/Caspase-3信号通路在异烟肼(INH)诱导人正常肝细胞(L-02细胞)凋亡中的作用及槲皮素的保护效应。方法:将L-02细胞随机分为对照组、INH组(10 mmol/L INH)、25μmol/L槲皮素组(10 mmol/L INH和25μmol/L槲皮素)、50μmol/L槲皮素组(10 mmol/L INH和50μmol/L槲皮素)。各组均处理24 h后,应用MTT法检测L-02细胞存活率,分光光度法检测细胞上清液中LDH活性,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡率;制备L-02细胞线粒体,利用DCFH-DA和Rho-123荧光探针检测活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位(ΔΨm),应用Western blot检测Caspase-3蛋白的表达。结果:与对照组比较,INH组细胞存活率显著降低(P<0.01),与INH组比较,50μmol/L槲皮素处理组细胞存活率明显增加(P<0.01);INH组细胞LDH活性、细胞凋亡率、线粒体ROS水平较对照组显著升高(P<0.01),25和50μmol/L槲皮素组细胞LDH活力、细胞凋亡率、线粒体ROS水平较INH组明显降低(P<0.05或P<0.01),且50μmol/L槲皮素组作用更显著;INH组细胞线粒体ΔΨm较对照组显著降低(P<0.01),25和50μmol/L槲皮素组细胞线粒体ΔΨm较INH组明显升高(P<0.05或P<0.01),50μmol/L槲皮素组的作用更加明显;与对照组比较,INH组细胞Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01),与INH组比较,25和50μmol/L槲皮素组细胞Caspase-3蛋白表达明显减少(P<0.05或P<0.01),且50μmol/L槲皮素组作用更明显。结论:INH可以诱导L-02细胞发生凋亡,ROS/Caspase-3信号通路参与了其凋亡的过程;槲皮素对INH诱导的细胞凋亡具有保护效应,机制可能与其减少ROS释放,抑制ROS/Caspase-3信号通路有关。