AMPK活性对HeLa细胞内质网功能稳态的影响

摘要

目的:探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对He La细胞内质网应激的影响。方法:试验分为对照组(1‰DMSO)、内质网应激诱导组(2μg/m L衣霉素或500 nmol/L MG132内质网应激诱导剂诱导)和内质网应激干预组[衣霉素或MG132+2 mmol/L AMPK激动剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺-1-B-呋喃核糖苷(AICAR)干预组、衣霉素或MG132+2 mmol/L AMPK激动剂二甲双胍干预组以及衣霉素或MG132+0.5 mmol/L AMPK抑制剂Compound C干预组],以探究各处理组中AMPK活性状态对内质网应激的影响。收集对数生长期的He La细胞,分组诱导孵育后,用Western blot检测He La细胞AMPK/T-172磷酸化水平及内质网应激标志蛋白(p-elf2α、Grp78和XBP-2+2+1s)的表达,并采用细胞内钙集群检测分析(Indo-1 ratiometric Ca analysis)检测各组He La细胞内Ca浓度的变化。结果:衣霉素和MG132可诱导内质网应激标志蛋白p-elf2α、Grp78和XBP-1s的表达。AMPK激动剂AICAR和二甲双胍干预可降低上述3种内质网应2+激标志蛋白的表达,并降低细胞胞浆内因内质网应激导致的Ca浓度升高,与对照组比较,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论:AMPK激活能缓解He La细胞中的内质网应激,维持细胞内质网的功能稳态,可能对提高肿瘤细胞的应激耐受能力起到主要作用。