重组人源白细胞介素-24联合重组人源核心蛋白聚糖对人类肝细胞癌HepG2细胞增殖抑制和凋亡诱导协同效应的研究

摘要

目的观察外源基因重组人源白细胞介素（IL）-24（rhIL-24）联合重组人源核心蛋白聚糖（rhDCN）对人类肝细胞癌HepG2细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用脂质体瞬时转染法将pcDNA3.1（+）-IL-24和pcDNA3.1（+）-DCN质粒转染至HepG2细胞,48 h后倒置显微镜下观察细胞生长状况、形态学改变。分别在转染后24h、48h和72h,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察IL-24和DCN单独及联合转染对HepG2细胞的增殖抑制效应。转染后48 h流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况,并进行细胞周期阻滞分析。结果与对照组相比,转染目的基因48 h后显微镜下可见细胞生长不同程度地被抑制,并可见典型的凋亡细胞形态改变,以联合转染组改变更为明显。MTT结果显示转染后48 h和72 h,双基因联合转染组的抑制率分别是（31.88±6.57）%和（36.83±3.76）%,与对照组和单独转染组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。流式细胞术结果显示,单独转染IL-24和DCN基因可诱导HepG2细胞出现不同程度凋亡,而双基因联合转染组细胞凋亡率可达（32.56±0.90）%,与空质粒转染组的（2.98±0.72）%、空白细胞对照组的（3.50±0.92）%、IL-24组的（20.01±1.08）%和DCN组的（22.20±0.91）%比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。细胞周期分析结果表明,与对照组相比,IL-24基因转染组的G2/M期和DCN基因转染组的G0/G12期细胞比例明显增高分别为（11.24±0.35）%、（77.93±0.67）%,而双基因联合转染组G0/G1期和G2/M期细胞比例同时增高,分别是（71.36±0.60）%和（10.39±0.67）%,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论联合转染IL-24和DCN基因可以协同发挥较单独应用更强的抑制HepG2细胞增殖和诱导HepG2细胞凋亡的作用。IL-24可使HepG2细胞发生G2/M期阻滞,DCN可使HepG2细胞发生G0/G1期阻滞,双基因联合使HepG2细胞同时发生G2/M期和G0/G1期阻滞,是IL-24和DCN对HepG2细胞增殖抑制和凋亡诱导协同效应的可能机制。