shRNA介导沉默肺腺癌转移相关转录本1表达对人卵巢癌细胞株OVCAR3侵袭与转移的影响

摘要

目的检测肺腺癌转移相关转录本1（MALAT-1）在人卵巢癌细胞株中的表达,并探讨shRNA介导沉默MALAT-1表达对卵巢癌细胞OVCAR3生物学功能的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测ES-2、SKOV3、OVCAR3、A2780 4株卵巢癌细胞中MALAT-1mRNA水平的表达差异,设计构建4条特异性干扰MALAT-1表达的shRNA-pGPU6/GFP/Neo表达载体和一条不干扰任何基因表达的空载体作为阴性对照,转染高表达MALAT-1的OVCAR3细胞,qRT-PCR筛选并鉴定有效沉默MALAT-1的shRNA序列。应用CCK-8比色法、体外黏附与划痕实验、Transwell迁移及侵袭实验检测MALAT-1沉默后OVCAR3细胞生长增殖、黏附、划痕修复、迁移及侵袭能力的改变。结果筛选出高表达MALAT-1的OVCAR3细胞株,有效沉默MALA-1基因后,OVCAR3细胞株的增殖、划痕修复能力明显抑制,黏附能力有不同程度降低。Transwell迁移实验中,干扰组转入底层膜细胞数量为（52.17±4.48）个,低于阴性对照组的（286.50±12.23）个和空白对照组的（295.67±6.96）个;在Transwell侵袭实验中,干扰组转入底层膜细胞数为（37.33±2.40）个,低于阴性对照组的（239.00±15.72）个和空白对照组的（222.67±20.85）个,干扰组与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.001）。结论利用shRNA介导沉默MALAT-1的表达可以有效抑制卵巢癌细胞株OVCAR3的增殖、黏附、划痕修复以及迁移、侵袭能力,MALAT-1有望成为卵巢癌治疗的有效靶基因。