杜氏盐藻DsKASⅢ基因的分离鉴定及其在氮胁迫下的表达分析

摘要

分离鉴定杜氏盐藻(Dunaliella salina)β-酮脂酰-ACP合酶Ⅲ(β-ketoacyl-ACP synthase Ⅲ,DsKASⅢ)基因并解析其编码蛋白理化特征及功能.依据同源克隆,分离杜氏盐藻DsKASⅢ基因编码序列,采用生物信息学方法解析DsKASⅢ编码蛋白的理化特性及功能,qRT-PCR检测缺氮条件下DsKASⅢ的表达谱,并检测细胞总油脂和β-胡萝卜素含量的变化.结果 表明,杜氏盐藻KASⅢ基因含有9个外显子,ORF为960 bp,编码蛋白为319 aa.DsKASⅢ蛋白理论等电点pI为6.21,分子量为33.3 kD.亚细胞定位预测DsKASⅢ蛋白呈镶嵌状锚定在叶绿体内膜上,这种构象有助于利用能量高效率催化生化反应.DsKASⅢ蛋白二级结构主要由α-螺旋(35.11％)、β片层(25.71％)和无规则卷曲(27.90％)组成.三维模拟显示,DsKASⅢ蛋白以同源二聚体形式发挥催化功能的.系统发育分析表明,DsKASⅢ蛋白与菜茵衣藻KASⅢ蛋白亲缘关系最近,暗示其可能有共同的进化来源.qRT-PCR分析揭示,氮胁迫培养条件下,DsKASⅢ基因的表达显著升高,且在缺氮第3天时,表达量达峰值,比正常氮充足培养高1.1倍.氮胁迫培养的藻细胞总脂含量和β-胡萝卜素含量分别比正常氮充足培养的藻细胞提高49.05％和33.20％.氮胁迫能诱导DsKASⅢ基因的上调表达,进而促进杜氏盐藻细胞合成和积累高量油脂和β-胡萝卜素.研究为全面阐明氮胁迫条件下杜氏盐藻油脂及β-胡萝卜素合成及调控机制提供了科学依据.