高效液相色谱法测定红树林放线菌DNA的(G+C)mol含量

摘要

应用高效液相色谱法测定了放线菌的(G+C)mol%,并就有关分析条件和DNA水解条件进行了优化选择。以Escherichia.coli DH5α作为标准菌株,实验室分离鉴定的8株红树林放线菌作为待测菌株,采用流动相为20mmol/LKH_2PO_4缓冲液(pH 5.6):甲醇(体积比90:10),检测波长为260 nm,流速为1 ml/min,柱温为35℃,分析时间15 min对4种碱基进行分离。结果表明:标准碱基溶液的pH值、流动相的组成和pH值是影响各碱基色谱峰分离和峰形的主要因素。在优化选择的条件下测定,DNA碱基分离效果好,无杂峰干扰,以峰面积计算得到标准菌株Escherichia coli DH5α的(G+C)mol%为54.9694%与已经报道的差异不显著;待测菌株的(G+C)mol%均在菌株所在科或属下的(G+C)mol%范围内;采用酸水解放线菌的DNA可缩短鉴定时间,步骤简明。实验结果充分显示高效液相色谱法测定放线菌(G+C)mol%快速、准确、结果稳定,是放线菌分类鉴定的一种可靠方法。