PRRS病毒主要受体蛋白CD151和CD163真核表达载体的构建

摘要

为了进一步研究PRRSV与细胞受体之间的相互作用机理,通过基因工程方法从PAM细胞中克隆获得了CD151和CD163全长编码片段,利用Sal和Kpn Ⅰ内切酶对回收得到的CD151(762 bp)和CD163(3 333 bp) DNA片段进行酶切,构建了pIRES2-EGFP-CD 151和pIRES2-EGFP-CD163真核表达载体.经PCR和酶切鉴定后,分别提取重组质粒进行细胞转染.荧光显微镜下可见单独转染CD151和CD163基因或CD151/CD163共转染的Marc 145细胞表达强烈的绿色荧光,Western blot分析结果进一步证实,CD151和CD163蛋白在转染后的细胞中获得超表达.猪CD151和CD163真核表达载体的成功构建为进一步探索CD151和CD163在PRRSV感染细胞过程中的协同作用提供了物质基础,特别是对深入研究PRRS病毒的入侵及宿主识别具有重要意义.