Wistar大鼠SONIC HEDGEHOG基因的克隆和表达

摘要

为了获得SHH蛋白以研究它在治疗神经变性疾病中的作用,本室提取不同胚龄Wistar胎鼠中的总RNA,应用RT-PCR技术获得SHH-N的cDNA,重组于pGEM-T载体,经测序鉴定后,构建原核表达质粒并获得表达菌株Q15-SHH-N,然后诱导SHH蛋白的表达.结果发现,在E11.5-E20.5胎鼠的脊索中能克隆到630 bp的cDNA片段,并且随胚龄增加,此片段的表达量逐渐减少;测序结果显示,此片段及其所编码的氨基酸序列同数据库中人、小鼠和SD大鼠的SHH-N的序列有较高同源性;表达菌株经诱导后产生约21 kD的融合蛋白.提示SHH-N是一种发育相关基因,在不同种属中的同源性较高,并且在原核系统中能进行表达.