小鼠骨髓基质细胞Kusa-A1成骨分化中CBF1的作用

摘要

目的揭示CBF1在骨髓基质细胞Kusa-A1成骨分化过程中的作用.方法采用基因转染法建立CBF1稳定过表达细胞系Kusa-A1/CBF1,检测其成骨活性.指标包括细胞钙沉积能力、碱性磷酸酶活性、体外钙化结节(CN)形成、实时PCR测定细胞骨钙素(OC)和骨桥蛋白(OPN)基因表达、蛋白印迹检测细胞RANKL蛋白.最后用报告基因法检测CBF1对HES1启动子活性的影响.结果经RT-PCR和Western blot鉴定,Kusa-A1/CBF1细胞建立成功.与对照细胞系Kusa-A1/host相比,Kusa-A1/CBF1细胞的钙沉积能力、CN形成能力均显著提高;Kusa-A1/CBF1细胞OC和OPN基因表达和RANKL蛋白水平明显高于对照细胞.瞬时转染Notch的细胞内结构域NICD促进HES1的启动子活性,这一作用被CBF1强烈抑制.结论CBF1可以促进Kusa-A1的成骨分化,该作用至少部分是通过影响Notch信号实现的.