分泌型重组mPSMA腺病毒的构建及表达

摘要

目的 构建分泌型重组小鼠前列腺特异膜抗原腺病毒(Ad-mPSMA),并检测其免疫效果.方法 利用AdEasy重组腺病毒载体系统,通过PCR扩增小鼠PSMA全长序列,并在基因的5'端加上人IL-2的信号肽序列,亚克隆至pAdeno Vator CMV5穿梭质粒,与pAdenoVator △E1/F3进行同源重组获得pad-mPSMA重组质粒,经HEK293细胞包装扩增获得重组病毒颗粒.通过RT-PCR及Western blot检测小鼠PSMA基因在HeLa细胞中的转录及表达.以该重组腺病毒免疫小鼠,对mPSMA的特异性抗体进行检测.结果 成功将mPSMA基因克隆至pAdeno Vator △E1/E3载体上,病毒滴度为1.32×10~(11)IU/mL,RT-PCR证实mPSMA的转录,Western blot证实mPSMA的分泌表达,并在小鼠血清中检测到mPSMA的特异性抗体.结论 成功构建分泌型重组mPSMA腺病毒,为前列腺癌特别是激素难治性前列腺癌的预防和治疗提供了更广阔的前景.