PIWIL系列蛋白多克隆抗体制备、鉴定及组织分布

摘要

目的 制备PIWIL蛋白多克隆抗体,鉴定其特异性,初步探讨其在人类正常及肿瘤组织中的分布.方法 合成特异性PIWIL多肽,以马来酰胺活化匙孔血监蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏大白兔,制备兔抗人PIWIL多克隆抗体,用亲和层析法纯化抗体.用ELISA和Western blot方法 进行抗体验证,应用人组织芯片进行PIWIL免疫组化研究.结果 通过构建系列PIWIL多肽-KLH载体复合物致敏大白兔,成功制备4个兔抗人PIWIL蛋白多克隆抗体,证实兔抗人PIWIL抗体可特异性识别PIWIL多肽,该抗体在大多数正常及肿瘤组织上皮来源细胞胞质中旱阳性染色.结论 成功制备系列兔抗人PIWIL多克隆抗体,为进一步研究PIWIL在miRNA/RNAi通路中的作用及在人类疾病中的意义提供了有利工具.