低氧射线双调控的TK表达载体的构建及其对人乳腺癌细胞系的放射增敏作用

摘要

目的 利用AdEasy系统构建低氧射线双调控的TK表达载体--腺病毒Ad.HRE.CArG.HSV-TK,并观察其对人乳腺癌细胞系Bcap37和MDA-MB-435的放射增敏作用.方法 用分子克隆技术构建插入HRE.CArG.HSV-TK片段的Ad.HRE.CArG.HSV-TK.CsCl梯度离心法纯化病毒,用AdEasy系统GFP标签测定病毒功能滴度.Ad.HRE.CArG.HSV-TK体外转导细胞48h,流式细胞仪测GFP阳性率,Real-time RT-PCR和Western blot检测TK mRNA和蛋白表达.MTT法检测腺病毒(Ad)转导联合放射(RT)对细胞的生长抑制作用和放射增敏比(SER).结果 Ad.HRE.CArG.HSV-TK滴度为2.1×109TU/mL.50 MOI病毒转导Bcap37和MDA-MB-435细胞48 h,GFP阳性率分别为92%和93%,TK基因表达明显增加(P<0.05).Ad与RT联用组(Ad+RT)细胞生长抑制率明显高于Ad组和相应同等剂量RT组(P<0.05),SER为1.55.结论 应用AdEasy系统可制备同时表达GFP和TX的重组腺病毒.腺病毒对乳腺癌细胞具放射增敏作用,为进一步开展乳腺癌的基因放射治疗奠定基础.