嗜热真菌Thermomyces lanuginosus A_(236)热稳定葡萄糖淀粉酶的纯化及其特性

摘要

嗜热真菌ThermomyceslanuginosusA_236在液体培养基中50℃下静止培养14天，粗提酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Toyopearl离子交换层析、Butyl－Toyopearl疏水层析、SephacrylS100凝胶过滤和FPLCMonoQ离子交换层析，得到了凝胶电泳均质的葡萄糖淀粉酶。酶促反应产物经TLC分析为葡萄糖，证明纯化的酶为葡萄糖淀粉酶（EC3．2．1．3）。SDS－PAGE测定其分子量为72，000，不具亚基，PI为4．0，富含Val和Leu。酶反应最适温度和pH分别为70℃和5．0。在pH5．0条件下，酶在60℃保温1h，仍具有原酶活性。酶活性在70℃和80℃的半衰期分别为20min和6min。Ca2+对酶有激活作用，Fe3+、Al3+、Hg2+等金属离子对酶活力有一定的抑制作用。纯酶碳水化合物含量为12．4％。纯酶可水解可溶性淀粉、直链淀粉、支链淀粉、糊精、糖原、麦芽三糖和麦芽糖，其中可溶性淀粉为最适底物。