miR-338通过靶向NRP1抑制口腔鳞癌细胞侵袭与迁移

摘要

目的探讨miR-338对口腔鳞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭能力的影响,并初步分析其可能机制。方法通过荧光定量PCR法检测OSCC细胞株和组织标本中miR-338 的表达情况;Boyden小室法检测miR-338对OSCC细胞迁移能力的影响;采用伤口愈合实验检测miR-338对OSCC细胞侵袭能力的影响;采用TargetScans靶基因预测软件预测miR-338可能的下游靶基因,荧光素酶报告基因实验验证预测的神经纤毛蛋白1(NRP1)是miR-338的靶基因;进一步采用荧光定量PCR法检测OSCC组织标本中miR-338靶基因NRP1的表达情况;Western blotting法检测miR-338对NRP1蛋白表达的影响。结果与正常组织相比,miR-338在OSCC组织中的表达水平显著降低(P<0.01);与正常口腔黏膜上皮细胞相比,miR-338在OSCC细胞株中的表达水平显著降低(P<0.01),尤其在侵袭性相对较高的OSCC细胞株UM-1和CAL-27中的表达水平降低更明显(P<0.01)。转染miRNA-338类似物可显著抑制OSCC细胞株UM-1和 CAL-27的侵袭和迁移能力(P<0.01),而转染miRNA-338抑制剂可明显促进OSCC细胞株UM-1和 CAL-27的侵袭和迁移能力(P<0.01)。TargetScans靶基因预测软件预测NRP1为miR-338的功能性靶基因,并在荧光素酶报告基因实验中得以验证。Western blotting结果显示,增加OSCC细胞株UM-1和CAL-27中miR-338的表达可显著下调NRP1蛋白的表达;在OSCC组织中,miR-338与NRP1的表达水平呈负相关(r=-0.7315,P<0.01)。当敲低OSCC细胞株UM-1和CAL-27中NRP1的表达后,可显著削弱miR-338抑制剂对UM-1和CAL-27细胞迁移和侵袭的促进作用(P<0.01)。结论 miR-338可通过靶向下调NRP1的表达来抑制OSCC细胞的迁移和侵袭。