驴骨胶原肽制备方法的初步建立及分子量检测

摘要

旨在建立驴骨胶原肽的制备方法,并对其分子量进行检测.以牛血清白蛋白为对照品,建立多肽含量和OD650 nm值的标准曲线方程;模拟人工胃液、肠液环境,以驴骨胶原肽一级、二级酶解产物多肽含量为评价指标,在筛选胃蛋白酶和胰蛋白酶最佳酶解时间和加酶量的基础上,采用二级生物酶解技术制备驴骨胶原肽;应用SDS-PAGE法对制备的驴骨胶原肽的分子量进行检测.结果表明,建立的多肽含量和OD650nm值标准曲线方程为:y=0.1639x-0.1496,R2=0.9989;应用胃蛋白酶进行一级酶解驴骨胶原肽的最适反应条件为:pH值在2.5～3.0,加酶量2.0％、酶解时间2.0 h;应用胰蛋白酶进行二级酶解驴骨胶原肽的最适反应条件为:pH值在7.5～8.0,加酶量2.0％、酶解时间2.5 h;经SDS-PAGE法检测,根据上述最适反应条件制备的驴骨胶原肽的分子量在10 kDa左右.研究结果为开发适合人体吸收分子量的驴骨胶原肽原料以及后续产品的研发提供了技术参考.