基于TaqMan实时荧光PCR检测植物中转基因成分

摘要

转基因植物的安全性一直备受关注,转基因成分检测是保障食品安全、维护消费者知情权的重要手段。本研究构建并鉴定了pCry3A、pCry1A(c)、pCP4-EPSPS和pCTP2-CP4-EPSPS 4种阳性质粒,并在转基因棉花、转基因大豆、转基因小麦、转基因玉米、非转基因玉米中分别检测玉米内源基因(adh1)、抗虫基因(Cry3A、Cry1A(c))和抗除草剂基因(CP4-EPSPS、CTP2-CP4-EPSPS),最后将转基因棉花和转基因大豆DNA模板原液进行梯度稀释确定Cry1A(c)和CP4-EPSPS的检出限,通过检出限检测建立标准曲线确定此方法的转基因成分定量检测能力。结果表明:4种阳性质粒鉴定结果良好,可以作为转基因检测的阳性对照;转基因棉花为转入Cry1A(c)基因的抗虫棉;转基因大豆为转入CP4-EPSPS基因的抗除草剂大豆;转基因小麦为转入Cry1A(c)基因的抗虫小麦;转基因玉米为转入Cry1A(c)、CP4-EPSPS、CTP2-CP4-EPSPS基因的混合转基因玉米;Cry1A(c)和CP4-EPSPS的引物和探针的检出限均可达0.1ng;建立的2种标准曲线的R2≥0.95,说明引物和探针可以满足定量检测要求。本研究对TaqMan实时荧光PCR法检测植物中的转基因成分提供一些借鉴,同时为保障食品安全、维护消费者知情权提供方法支持。