转基因玉米

摘要： 转基因抗虫玉米CM8101是经人工改造合成的转Bt抗虫基因Cry1Ab⁃Ma转基因玉米新品系,由我国自主研发,具有更优良的抗虫性,目前已进入生产性试验阶段,具有广阔的产业化应用前景。依据CM8101的5′端旁侧序列信息,设计并筛选出最佳引物探针组合,通过普通PCR和实时荧光PCR技术,建立了转基因抗虫玉米CM8101的两种特异性定性检测方法。结果显示,普通PCR检测方法检出限达0.1%,实时荧光PCR检测方法检出限达0.05%。这两种定性检测方法的建立为今后准确高效检测转基因抗虫玉米CM8101及其产品提供了新的参考方法。

摘要： 随着我国畜牧业的发展,对饲料用转基因玉米的需求不断增加。本文论述了当前饲料用转基因玉米加工管理的现状、存在的不足,并提出进一步做好饲料用转基因玉米加工管理的建议,以达到农业转基因生物安全管理,防范农业转基因生物对人类、动植物、微生物和生态环境构成的危险或者潜在风险,保护生态环境,保障转基因生物产业健康持续发展的目的。

摘要： 议题背景随着科学技术的发展和当今社会的高标准、高需求,越来越多的转基因产品流入了社会。转基因棉花的问世减少了虫害,提高了产量;转基因番茄延长了保存时间;转基因玉米迎合了大家的不同口味需求;转基因大豆抵抗病虫害、减少使用除草剂,增加了维生素、脂肪和蛋白质的含量……随着转基因产品的大量出现,人们的态度是褒贬不一。

摘要： 鉴定外源DNA片段在受体基因组中的插入位点、整合序列与拷贝数信息是转基因植物安全评价体系的关键环节。传统的转基因植物分子特征鉴定技术繁杂费力、耗时低效且具有一定的局限性。本研究利用基因组重测序技术与实验室自建的数据分析流程,针对转基因玉米GM11061开展了分子特征鉴定研究,结果表明:外源DNA片段仅插入受体基因组一个拷贝,位于5号染色体198,621,57~198,621,620 bp之间,不含载体骨架序列,并通过Sanger测序验证了其上下游结合位点。测序数据量梯度分析显示,最低~5×的重测序原始数据可实现该整合位点的鉴定。本研究证实Illumina高通量测序技术与配套的数据分析方法结合可实现简易、快速、精准的植物分子特征鉴定研究。本研究结果有助于植物功能基因组学基础研究,同时也为转基因安全评价体系的完善提供技术支撑。

摘要： 对转基因玉米深加工产品中DNA的提取技术进行了研究。首先,通过经典CTAB法、CTAB初步改良法、CTAB有效改良法和煮沸法等4种方法提取了玉米片和爆米花中的DNA;其次,用琼脂糖电泳检测法将DNA进行了分离;再次,用紫外可见分光光度法检测出4种方法提取的DNA的纯度。结果表明,4种方法中的CTAB有效改良法提取DNA的完整性、纯度更好。

摘要： 为了解种植抗虫-耐除草剂转基因玉米是否会对土壤中的固碳细菌群落产生影响,种植携带有抗虫基因cry1Ab和耐除草剂基因epsps的转基因玉米C0030.3.5(TM),以亲本非转基因玉米DBN318(PM)为对照,采用荧光定量PCR技术(qPCR)和末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)技术,在不同生长期测定2个玉米品种的土壤固碳细菌cbbL基因丰度、群落多样性和组成.研究结果表明,同一生长时期内TM和PM的土壤固碳细菌cbbL基因丰度的差异不具有统计学意义(P>0.05).相关分析结果显示,土壤固碳细菌cbbL基因丰度与土壤的硝态氮含量呈极显著正相关(P0.05).同一生长时期,PM和TM土壤固碳细菌的Shannon指数和Evenness指数差异不具有统计学意义(P>0.05).RDA分析结果显示,土壤pH值、硝态氮和有机质含量均显著影响土壤固碳细菌群落结构的组成.玉米不同生长时期土壤理化性质发生变化,导致土壤固碳细菌的群落结构发生改变.

摘要： 玉米螟和田间杂草严重影响我国玉米的生长发育,导致玉米产量和品质下降。培育具有抗虫、耐除草剂等复合性状的转基因玉米成为转基因玉米育种的一个趋势。将cry1Ab、cry1F和cp4epsps构建在同一载体上并利用农杆菌转化到玉米Hi-II中,通过与玉米自交系郑58进行回交转育,获得了具有郑58遗传背景并兼具抗虫和耐除草剂性状的转基因玉米株系BFL4-1。全基因组高通量测序和侧翼序列测序分析表明,BFL4-1中目的基因插入片段位于第3染色体基因间区,为单一插入位点。转录水平和蛋白水平检测结果表明,cry1Ab、cry1F和cp4epsps在不同组织中均能稳定表达。田间玉米螟接虫和喷施草甘膦试验表明,BFL4-1株系高抗玉米螟并且对草甘膦具有较好的耐受性,与对照相比在农艺性状方面无显著差异。由此表明,获得的BFL4-1为具有抗玉米螟和耐草甘膦除草剂复合性状的转基因玉米新材料。

摘要： 随着转基因作物的发展和推广,具有复合性状的转基因作物种植面积逐年增加。传统的转基因复合性状作物具有抗虫和耐除草剂性能,聚合其他性状的转基因作物培育逐渐受到重视。转基因玉米株系BBHTL8-1含有Cry1Ab、Cry3Bb、cp4epsps、ZmHPT和ZmTMT共5个基因表达框,外源插入片段位于玉米基因组第4染色体,插入基因区间,在3’侧翼序列有31 bp缺失。在BBHTL8-1中,这5个基因能够稳定遗传,在转录水平和蛋白水平上表达具有稳定性。BBHTL8-1高抗玉米螟,对草甘膦除草剂具有较高耐受性。BBHTL8-1籽粒中α-生育酚含量比非转基因对照郑58显著增加。BBHTL8-1与非转基因对照郑58在田间农艺性状方面无显著差异。因此,BBHTL8-1为转基因抗虫、耐除草剂和种子具有高α-生育酚含量的转基因新材料。

摘要： 目的:研究转Cry1Ab-ma基因玉米对大鼠的亚慢性毒性。方法:初断乳Wistar大鼠140只,随机分为7组:转基因玉米高中低3个剂量组(60%、30%、15%)、亲本玉米高中低3个剂量组(60%、30%、15%)以及1个常规基础饲料对照组,每组20只,雌雄各半。动物2只1笼喂养,自由进食饮水,连续观察90 d。每周称量饲料量及大鼠体重,在试验中、末期采集大鼠尿液和血液进行尿常规、血常规和血生化分析。实验末期称重脏器并计算脏器体重比,最后对大鼠脏器进行病理组织学检查。实验末期称重脏器并计算脏器体重比,最后对大鼠脏器进行病理组织学检查。结果:90 d的实验期内,各组大鼠均未发现中毒死亡情况。转基因玉米组个别评价指标虽与亲本玉米对照组或常规基础饲料对照组存在统计学差异,但指标水平在文献报道正常范围和历史对照范围内,且均未发现有生物学意义的改变。各受检脏器未见与受试物相关的病理改变。结论:现有实验结果不能证实转Cry1Ab-ma基因玉米对大鼠有亚慢性毒性作用。

摘要： 随着进口转基因玉米在饲料加工生产中的用量越来越大,做好转基因生物安全控制也越来越重要。本文从使用转基因玉米加工生产饲料在厂房环境、设备设施、生产工艺和管理制度等关键点提出做好转基因生物安全控制的管理措施,以防范农业转基因生物对人类、动植物、微生物和生态环境构成的潜在危险,达到加强农业转基因生物安全管理,保障人体健康和动植物、微生物安全,保护生态环境的目的。

摘要： 以玉米内源基因ZEIN及CaMV35S外源基因为检测目的基因,以环介导等温扩增(LAMP)技术为基础,建立了对转基因玉米的快速检测方法.以转基因玉米标准品为阳性对照、有机玉米为阴性对照进行结果验证,且验证结果通过实时荧光及荧光染料显色法直接肉眼直观判断是否为转基因玉米.结果显示:内源基因ZEIN实时荧光及荧光染料显色的检测结果与预测结果一致,因此配制的内源基因ZEIN反应体系可作为样品提取效果的质控;外源基因CaMV35S实时荧光及荧光染料显色的检测结果与预测结果一致,因此该体系适用于外源基因CaMV35S的检测.对于检测样品,两种方法的判定结果均为阳性,即检测玉米样品为转基因玉米.

摘要： 内参基因是转基因检测标识制度中所必需的检测参照基因.本研究首先利用BLAST和BLINK序列比对筛选得到转基因玉米检测内参基因的候选基因.然后从种内非特异性、种间特异性、拷贝数恒定等方面进行内参基因的筛选,经过非玉米物种和不同的玉米自交系品种中的物种特异性、种内非特异性检测,拷贝数分析,最后筛选获得玉米转基因检测内参基因GRMZM2G054655,定量检测灵敏度达到0.04ng,建立了转基因玉米检测的内参基因的筛选和检测体系.本研究筛选和鉴定得到的玉米转基因检测内参基因,将为转基因安全监管提供技术支持.

摘要： 本文进行BT11、MON810和T25常见3个转基因玉米品系质粒分子国家标准样品的研制.采用PicoGreen DNA分子荧光定量方法对标准样品进行定值,确定标准样品的标准值及其不确定度.均匀性和稳定性结果表明,所研制的转基因玉米3个品系标准样品均匀稳定.本文首次制备出具有溯源性的转基因玉米BT11、MON810和T25品系质粒分子国家标准样品,并获得了国家标准样品证书.

摘要： 本实验设计合成猪流行性腹泻病毒(PEDV)主要中和抗原基因(COE基因),将其克隆到植物表达载体pBAC9036中,该表达载体以编码除草剂草甘膦抗性的EPSP基因作为选择标记.用PDS1000/He基因枪转化玉米幼胚,经过愈伤组织诱导、分化再生培养,获得71棵转化再生植株,进一步进行田间草甘膦抗性筛选,最后获得2个T1代转基因玉米株系,PCR分子鉴定,确认外源目的基因已成功整合到玉米基因组.间接ELISA和Western检测结果均为阳性.取表达量较高的一个,提取叶片可溶性蛋白,改下注射免疫小鼠后可产生针对PEDV的特异性抗体.以上结果表明,获得的转基因玉米表达的COE蛋白具有反应原性和免疫原性,为进一步研究PEDV-COE转基因玉米口服疫苗奠定了基础.

摘要： 本文旨在研究转Bt玉米对育肥五指山猪生长性能及养分消化率的影响.选取6月龄遗传背景相近、初始体重(29.83±1.67)kg、健康育肥五指山猪32头,随机分为2个处理组,每个处理组设4个重复,每个重复4头.分别饲喂转Bt玉米(试验组)和非转基因玉米(对照组)日粮.试验为期60d.结果表明：1)试验组的末重、日增重、采食量及料重比均与对照组间差异不显著(P＞0.05);2)两组总能、干物质、粗蛋白质、粗脂肪、钙和磷的表观消化率间都未达到显著差异的水平(P＞0.05).综合认为,转Bt玉米对育肥五指山猪的生长性能及养分消化率未产生负面影响.

摘要： 以玉米杂交组合PA×PB的胚性愈伤组织为材料,通过农杆菌介导法将本实验室人工改造的Cry9HNt抗虫基因导入到了玉米基因组中,并对获得的转基因植株进行PCR鉴定,进而选取部分PCR呈阳性的植株进行Southern杂交,结果表明Cry9HNt基因已经整合到玉米基因组中.BT蛋白免疫试纸鉴定结果也进一步证实了目的蛋白的表达.对转基因T1代植株进行田间抗虫鉴定,结果表明转基因玉米植株的抗虫活性显著地优于非转基因对照,这也进一步证实了改造完成的Cry9 HNt基因具有良好的抗虫活性.

摘要： 本研究选用转Cry1Ac基因玉米Z58Ac-w的品种为研究材料,以非转基因玉米Z58为对照,取不同深度土壤剖面做纵向研究,采用传统培养平板计数法进行培养统计分析,同时对土壤样品采用纸片扩散法以裂解提取的BT蛋白液进行抑菌圈实验,以此来了解抗虫基因Cry1AC对土壤微生物的影响情况.结果显示:Z58Ac-w比Z58土壤微生物量有所增加,但差异不显著；从土壤微生物的垂直分布上看,10 cm微生物量最多达15.468302×106ng/g,但各层次差异不显著；裂解提取的BT蛋白液在土壤三大微生物,细菌、真菌、放线菌的培养基上均无抑菌圈的形成,与对照组别无差异.

摘要： 玉米粗缩病和玉米矮花叶病是世界上玉米产区普遍发生的玉米病毒性病害,已对玉米产区的感病品种造成严重减产.目前确定引起我国玉米粗缩病的病原主要为水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV),而引起我国玉米矮花叶病的病原主要为甘蔗花叶病毒(Sugar cane mosaic virus,SCMV).通过施用农药的方式防治玉米粗缩病和玉米矮花叶病很困难,培育抗病品种是其防治的最有效途径.植物抗病毒基因工程策略有多种,前人研究表明利用RNAi原理介导的抗病性特异性强,较易获得高抗甚至免疫的转基因植株,为作物抗病毒基因工程提供了更有效的途径.

摘要： 本文从抗虫转基因玉米研发概况、转Bt毒蛋白基因玉米的常用转化方法、转基因抗虫玉米转化体的鉴定方法、转基因植株的抗虫性分析鉴定及遗传稳定性评价与利用等五个方面对Bt毒蛋白基因在玉米上的遗传转化研究进展进行了综述，并对转Bt基因玉米的发展前景进行了展望和探讨。

摘要： 本文对采用基因枪介导法获得的转BT基因玉米植株进行PCR鉴定和Southern检测,在DNA水平上证实目的基因Cry1Ac-w成功转入玉米植株体内,同时又对其进行了BT蛋白试纸条检测和ELISA分析,在蛋白水平上检测分析了其在Z58Ac-w1和Z58Ac-w3两种转化体不同生育时期各组织器官的蛋白表达量.结果表明:同一生育育期内不同组织器官cry1Ac的蛋白表达量不同,差异显著,叶片蛋白表达量最高达153.3ng/g,根最低；不同生育期,cry1Ac在叶片中的表达量不同,差异显著,各生育期BT蛋白表达量顺序:抽穗期＞灌浆期＞成熟期.

摘要： 本发明提供了一种筛选标记自主控制剔除转基因载体及其在玉米无标记转基因育种中的应用，属于玉米分子育种技术领域，所述载体以pEGAD载体为骨架载体，使用EGFP和IPT基因的融合基因替换bar基因作为筛选标记；所述筛选标记的表达框整合在Cre/lox位点特异性重组系统中。所述应用包括以下步骤：将所述的载体转入玉米胚性愈伤组织中，获得有绿色荧光表达的玉米胚性愈伤组织；热激处理后，分化生根培养无绿色荧光表达的玉米胚性愈伤组织获得转基因植株。所述载体提高了筛选效率，同时实现了转基因筛选标记的剔除，为大范围开展无标记的玉米转基因工作提供了理论和应用基础。

摘要： 本发明提供了一种鉴定转基因植物或者转基因玉米双抗12‑5外源基因插入染色体位置的方法及其应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供的鉴定转基因植物外源基因插入染色体位置的方法，通过筛选与阴性转基因个体连锁的分子标记引物，并根据分子标记引物所在的位置确定外源基因的位置，能够实现对基因组相对复杂的物种如玉米，大豆等作物的外源基因插入位置的快速准确识别。此外，本发明还提供了该方法在转基因玉米双抗12‑5中的应用，准确识别了双抗12‑5中，外源基因插入染色体的位置。另外，本发明还提供了上述方法在转基因作物育种，分子特征安全性评价以及转基因产品溯源等方面中的应用，具有良好的应用前景和可观的市场价值。

摘要： 本发明涉及基于UHPLC‑MS获取转基因和非转基因玉米代谢差异的方法，所述方法采用超高效液相色谱‑高分辨率质谱联用分析平台对玉米叶片提取液进行分析得到玉米叶片代谢轮廓，然后用多变量统计方法区分转基因和非转基因玉米数据，获得对代谢表型差异有重要贡献的化合物。所述方法操作简单，可进行高通量检测，尤其是检测分辨率高，可以消除干扰，实现高效可靠的代谢物信息识别，得到的结果更真实可靠。所述方法可以为深入研究转基因玉米的安全性提供根据。

摘要： 本发明涉及基于GC‑MS获取转基因和非转基因玉米代谢差异的方法；所述方法基于气相色谱‑高分辨率质谱联用系统进行玉米叶片代谢轮廓分析，然后用多变量统计方法区分转基因和非转基因玉米数据，并对转基因和非转基因玉米叶片代谢差异进行研究的方法，获取对代谢表型差异有重要贡献的化合物。所述方法更适合快速色谱分析，可以快速可靠地识别、定量和确认更多化合物；更重要的是，其检测分辨率高，保证谱峰扫描点的完整性，不遗漏任何细节，实现高效可靠的代谢物信息识别，得到的结果更真实可靠。所述方法可以为深入研究转基因玉米的安全性提供根据。

摘要： 本发明公开了一种区分转基因玉米和非转基因玉米的检测方法，采用太赫兹（THZ）检测的方式，对转基因与非转基因玉米压片样本进行了扫描，获取了转基因玉米和非转基因玉米的太赫兹（THZ）吸收谱。在扫描得到的太赫兹吸收谱中，通过观察玉米样本的扫描结果图，取颜色最深、特征最明显的8到10个样本点，并取它们的平均值，绘制各个品种玉米样本的太赫兹吸收谱。然后经预处理得到THZ频域谱，通过LS—SVM、BPNN、RF方法在matlab中对数据进行建模分析比较，从中找到一个最优的模型，以此来准确的区分转基因与非转基因玉米。本发明解决了目前检测转基因产品的高成本传统破损式化学检测方法制样繁琐、检测时间长、需要专业人员操作的问题，本发明THZ检测方法具有无损、效率高、快速等特点，可应用于区分转基因玉米和非转基因玉米的检测。

摘要： 本发明提供了一种鉴定转基因植物或者转基因玉米双抗12‑5外源基因插入染色体位置的方法及其应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供的鉴定转基因植物外源基因插入染色体位置的方法，通过筛选与阴性转基因个体连锁的分子标记引物，并根据分子标记引物所在的位置确定外源基因的位置，能够实现对基因组相对复杂的物种如玉米，大豆等作物的外源基因插入位置的快速准确识别。此外，本发明还提供了该方法在转基因玉米双抗12‑5中的应用，准确识别了双抗12‑5中，外源基因插入染色体的位置。另外，本发明还提供了上述方法在转基因作物育种，分子特征安全性评价以及转基因产品溯源等方面中的应用，具有良好的应用前景和可观的市场价值。

摘要： 本发明属分子生物学及基因工程技术领域，为解决目前转基因植物检测中用一系列操作复杂、耗时、高成本体外分子检测的技术。提供一种用荧光素酶报告分子活体整株检测转基因玉米的方法，荧光素酶报告基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。用超声波介导花粉的转化方法将荧光素酶基因导入到玉米中去，用植物活体成像技术活体、整株、实时检测转基因玉米中的荧光素酶的荧光信号,通过信噪比的引入和应用可鉴定高表达的转基因植株。直观、准确、实时、低成本地淘汰大量非转基因和表达不强的植株或株系,为植物功能基因组学研究中转基因植株的鉴定提供了操作简单、准确、快速、低成本的鉴定方法。

摘要： 本发明涉及基于GC‑MS获取转基因和非转基因玉米代谢差异的方法；所述方法基于气相色谱‑高分辨率质谱联用系统进行玉米叶片代谢轮廓分析，然后用多变量统计方法区分转基因和非转基因玉米数据，并对转基因和非转基因玉米叶片代谢差异进行研究的方法，获取对代谢表型差异有重要贡献的化合物。所述方法更适合快速色谱分析，可以快速可靠地识别、定量和确认更多化合物；更重要的是，其检测分辨率高，保证谱峰扫描点的完整性，不遗漏任何细节，实现高效可靠的代谢物信息识别，得到的结果更真实可靠。所述方法可以为深入研究转基因玉米的安全性提供根据。

摘要： 本发明涉及基于UHPLC‑MS获取转基因和非转基因玉米代谢差异的方法，所述方法采用超高效液相色谱‑高分辨率质谱联用分析平台对玉米叶片提取液进行分析得到玉米叶片代谢轮廓，然后用多变量统计方法区分转基因和非转基因玉米数据，获得对代谢表型差异有重要贡献的化合物。所述方法操作简单，可进行高通量检测，尤其是检测分辨率高，可以消除干扰，实现高效可靠的代谢物信息识别，得到的结果更真实可靠。所述方法可以为深入研究转基因玉米的安全性提供根据。

摘要： 本发明提供了一种特异性剔除胚乳中外源基因的重组载体及其在构建无外源基因的转基因玉米中的应用，属于玉米生物技术育种技术领域。本发明以pEGAD载体为骨架载体，Cre/loxP系统中两个特异性识别位点loxP分别位于LB和RB，筛选标记表达框与Cre酶表达框和目标基因表达框插入在两个loxP位点之间；目标基因表达框为植物基因启动子驱动的靶基因；筛选标记表达框为标记蛋白基因和除草剂抗性基因形成的融合基因；Cre酶表达框为胚乳特异性表达启动子驱动的重组酶基因Cre。以玉米胚性愈伤组织为受体材料，构建一种胚乳中无外源基因的转基因玉米。利用重组表达载体实现了转基因成分在胚乳中精确剔除的转基因。