甘蔗茎RNA提取方法研究

摘要

[目的]找出提取甘蔗茎RNA的适宜方法。[方法]采用SDS法、试剂盒法、GHCL法3种方法提取甘蔗茎基因组RNA,并对提取的RNA进行质量比较。[结果]试剂盒法提取的RNA产率高,电泳条带清晰,RNA完整性好,无明显降解,OD260/OD280比值较好。试验操作要点:在RNA的提取过程中必须使操作温度保持在4℃左右(操作时温度可以通过垫加冰块来实现),从而充分抑制RNase的活性;植物组织称取要适量,将植物组织在液氮中充分研磨后,应在液氮还未充分挥发前将研磨物加入Eppendorf管中,样品要充分研磨,通过加大提取液中变性剂的量防止在此过程中内源RNase将植物组织中RNA降解;在用酚/氯仿/异戊醇抽提及氯仿/异戊醇抽提过程中,吸取上清液时,应尽量小心,不要吸取中间层从而防止酚类、蛋白质类的干扰。此外,提取的RNA还应及时保存于-70℃低温下,避免频繁冻融影响其质量以及RNA的降解。[结论]试剂盒法是有效提取甘蔗茎RNA的方法。该研究为甘蔗的分子生物学研究奠定了基础。