大字杜鹃RAPD反应体系的优化

摘要

以大字杜鹃为材料,以改进的CTAB法提取大字杜鹃叶片总DNA,分别就模板DNA浓度,引物浓度,DNTP浓度,Taq DNA聚合酶量及镁离子浓度对大字杜鹃RAPD反应结果的影响进行研究.通过对各因子的组合比较,建立了大字杜鹃RAPD反应的优化体系,即总反应体积为25μL,其中包括10 XTaq酶配套缓冲液2.5μL,模板DNA浓度50 mg/L,引物浓度0.5μmol/L,dNTP浓度0.15 mmol/L,Taq DNA聚合酶1 U,Mg2+浓度2.0 mmol/L,其余用重蒸馏水补足.扩增程序为94℃变性5 min,94℃变性1 min,38℃退火40 s,72℃延伸2min,共41个循环,72℃延伸7 min.