针刀对膝关节骨关节炎兔软骨PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬的影响

摘要

目的:基于PINK1/Parkin通路观察针刀干预对膝关节骨关节炎(KOA)兔软骨线粒体自噬的影响,探讨其抑制软骨损伤的作用机制。方法:新西兰兔随机分为正常组、模型组、针刀组,每组7只。模型组和针刀组参考Videman法建立KOA兔模型。针刀组取膝关节周围结节或条索进行常规针刀治疗,每周1次,连续3周。分别采用HE染色和透射电镜观察兔膝关节软骨组织形态学和细胞超微形态,流式细胞仪检测软骨细胞线粒体膜电位(Δψm)和活性氧(ROS)平均荧光强度并计算低Δψm细胞百分比,免疫荧光染色法检测软骨组织LC3B、PINK1和Parkin免疫荧光表达,Western blot法检测软骨组织p62、LC3Ⅱ/Ⅰ、PINK1和Parkin蛋白的表达水平。结果:与正常组相比,模型组兔膝关节软骨表面出现裂隙、组织纤维化,软骨细胞分布松散,自噬体减少,线粒体形态异常;软骨组织LC3B、PINK1、Parkin荧光强度,LC3Ⅱ/Ⅰ、PINK1、Parkin蛋白表达水平显著降低(P<0.01),软骨细胞低Δψm细胞百分比、ROS平均荧光强度、软骨组织p62蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组相比,针刀组兔膝关节软骨表面无明显缺损,软骨细胞相对密集,自噬体增多,线粒体形态正常;软骨组织LC3B、PINK1、Parkin荧光强度,LC3Ⅱ/Ⅰ、PINK1、Parkin蛋白表达水平显著升高(P<0.01,P<0.05),软骨细胞低Δψm细胞百分比、ROS平均荧光强度、软骨组织p62蛋白表达水平下降(P<0.01)。结论:针刀可能通过调节PINK1/Parkin通路促进线粒体自噬,改善KOA兔软骨损伤。