基于质谱测定小分子与Aβ亲和力的受体结合分析方法的建立和验证

摘要

建立基于质谱的受体结合分析方法 (MSBA),测定小分子探针与淀粉样蛋白-β(Aβ)聚集体的亲和力.针对阳性探针IMPY及其氘代产物IMPY-D6建立液相色谱-质谱(LC-MS)联用方法 和定量方法 ,随后进行基于质谱的饱和结合实验及竞争结合实验,最后将结果 与文献中放射性受体结合实验结果 进行比较.成功建立了IMPY的LC-MS方法 及基于质谱的受体结合测定方法 .其中,饱和结合实验中IM-PY与Aβ1-40及Aβ1-42的Kd分别为(3.80±0.39)nmol/L和(18.38±1.11)nmol/L.竞争结合实验中IMPY与Aβ1-40及Aβ1-42的Ki分别为(18.64±0.76)nmol/L和(25.44±2.38)nmol/L.均与文献中放射性受体结合实验结果 基本一致.MSBA作为一种非放射性结合实验方法 ,测定结果 与放射性受体结合实验基本一致,可用于小分子探针与Aβ的亲和力的测定,该技术平台可拓展至用于常规小分子配体与受体亲和力的测定.