烟草18S rDNA染色体原位杂交技术优化研究

摘要

荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)在细胞遗传学中有较多应用,其中重复序列常被作为探针来研究物种进化、分类.但现常用的探针序列均较长(200 bp-500 bp),杂交耗时较多.本研究以烟草(Nictiana tabacum)为材料,克隆并标记18S rDNA保守序列(254 bp),以其为探针对烟草染色体进行FISH,经18h杂交获得了清晰的信号.在此基础上,利用荧光素直接标记引物序列(寡聚核苷酸),经较短时间(2 h)的杂交,也获得了清晰的信号.以寡聚核苷酸为探针对云烟87四倍体、N.tabacum-N.plumbaginifolia五倍体、烟草六倍体、云烟87八倍体以及N.plumbaginifolia的染色体进行杂交,均获得了良好效果.且杂交液可简化配制,洗脱过程也可简化.18S rDNA寡聚核苷酸探针与5S rDNA寡聚核苷酸探针结合,实现了N.plumbaginifolia的18S rDNA和5S rDNA双色FISH.所以,该寡聚核苷酸序列可以应用于烟草属植物18S rDNA (45S rDNA)位点的分析,且较大程度缩短了操作时间并简化了操作过程.