首页> 中文期刊>中国烟草学报 >基于毛细管电泳的TILLING实验技术的建立

基于毛细管电泳的TILLING实验技术的建立

     

摘要

cellI enzyme that specifically cleaves mismatch in DNA double strands is one of the most important components of TILLING experiment platform. Crude extract of cellI enzyme was obtained from celery growing in Guiyang of Guizhou province. A pair plasmids with a known single base difference were used as substrate to verify cellI restriction enzyme activity of crude extracts, and cleavage products were detected by agarose gel electrophoresis and capillary electrophoresis, which confirmed cellI activity in crude extracts. An effective cellI digestion system was thus established: cellI enzyme effectively cut mismatch DNA in 15 µL digestion reaction solution including 8 µL PCR product, 4.5 µL ddH2O, 1.5 µL 10×cleavage buffer (pH 7.5, 500 mmol/ L KCL, 100 mmol / L Tris-Cl, 15 mmol / L MgCl2 ) and 1µL the 20 times dilution of cellI crude extraction after 60-min incubation under 42℃.%CEL I内切酶特异识别并切断错配碱基,是建立TILLING实验技术平台的关键之一。本文从贵州省贵阳市当地种植的西芹中获得CEL I酶粗提物,利用一对具有已知单碱基差异的质粒作为底物验证所提CEL I酶粗提物的酶切活性,通过琼脂糖电泳和毛细管电泳对酶切产物进行检测,表明所获芹菜粗提物具有CEL I活性。本实验建立了适宜烟草TILLING实验的CEL I粗提物酶切体系:酶切温度42℃,酶切时间60 min,酶切反应总体积15µL,包括8µL PCR产物、4.5µL ddH2O、1.5µL酶切缓冲液(pH 7.5,500 mmol/ L KCL,100 mmol / L Tris-Cl,15 mmol / L MgCl2)和1µL CEL I酶(稀释为原始粗提液0.05倍)。

著录项

  • 来源
    《中国烟草学报》|2014年第4期|75-78|共4页
  • 作者单位

    贵州省烟草科学研究院;

    烟草行业分子遗传重点实验室;

    贵州省贵阳市观山湖区龙滩坝路 550081;

    贵州省烟草科学研究院;

    烟草行业分子遗传重点实验室;

    贵州省贵阳市观山湖区龙滩坝路 550081;

    贵州省烟草科学研究院;

    烟草行业分子遗传重点实验室;

    贵州省贵阳市观山湖区龙滩坝路 550081;

    贵州省烟草科学研究院;

    烟草行业分子遗传重点实验室;

    贵州省贵阳市观山湖区龙滩坝路 550081;

    贵州省烟草科学研究院;

    烟草行业分子遗传重点实验室;

    贵州省贵阳市观山湖区龙滩坝路 550081;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 生物工程学(生物技术);
  • 关键词

    TILLING; 芹菜CEL I核酸酶; ABI遗传分析仪; 毛细管电泳;

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
获取原文

客服邮箱:kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备:11010802029741号 ICP备案号:京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有
  • 客服微信

  • 服务号