t-PA在昆虫细胞中的表达

摘要

将含完整阅读框架的人t-PA(tissue-type plasminogen activator, t-PA)cDNA克隆至昆虫细胞表达转移载体pBacPAK8中，获得重组质粒pBac-tPA.应用脂质体共转染法，将pBac-tPA和线性化杆状病毒BacPAK6 DNA共转染Tn-5B-1昆虫细胞.经空斑筛选获得11株重组病毒.经PCR鉴定与生物活性测定，获得一株高效表达t-PA的重组病毒BactPA3.t-PA表达活性在感染(MOI≈10)后72 h左右达到最高，为3.04×103 IU/mL.经SDS-PAGE纤维蛋白自显影分析，相对分子质量为68 000左右.