真菌嵌合体植酸酶的构建及其抗蛋白酶水解特性研究

摘要

在烟曲霉植酸酶(Afp)的基因上,通过PCR逐步将编码1-47、178-237及338-381多肽序列的DNA片段置换为黑曲霉NRRL 3135植酸酶(Anp)中的对应片段,构建了3个嵌合体(嵌合体Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ)基因,并在毕赤酵母中将其成功表达及纯化.所有的嵌合体和亲本植酸酶均能抵抗胃蛋白酶.在m(胰蛋白酶)/m(植酸酶)为0.1时,Anp完全失活;但Afp与所有嵌合体的活性仅损失13%～23%.胰蛋白酶水解产物的SDS-PAGE结果显示嵌合体Ⅱ与Ⅲ也能被胰蛋白酶严重水解,但非变性PAGE结果却表明它们在水解后仍能保持结构完整.嵌合体也具有一些与Anp及Afp相异的新pH曲线及耐热性.实验表明,通过替换基因片段改良真菌植酸酶可行.