基于Cre/Loxp系统的Ankle2基因敲除鼠模型的建立

摘要

建立Ankle2基因敲除小鼠模型,为研究该基因在小鼠体内所发挥的重要生理功能提供基础.本实验利用条件性基因敲除技术,进行打靶载体的设计与构建.将LoxP^(1st)插入到Ankle2基因的第二内含子里,在第五内含子里插入FRT-neo-FRT-Lox P元件,利用限制性内切酶DNA及Southern blot筛选出中靶ES细胞克隆,随后将发生同源重组的ES细胞注射进C57BL/6J小鼠囊胚中,移入受体小鼠子宫,将得到的嵌合体雄鼠与C57BL/6J雌鼠交配获得Ankle2-Floxed小鼠.随后将Ankle2-Floxed小鼠与全身表达FLP酶的小鼠进行杂交,将打靶载体中的Neo基因去除,获得F1代小鼠,F1代小鼠自交并经PCR鉴定筛选出Ankle2^(flox/flox)小鼠.Ankle2^(flox/flox)小鼠与全身或组织特异性表达Cre酶小鼠进行杂交,得到Ankle2基因杂合敲出小鼠,该小鼠自交,可获得Ankle2基因纯合敲除的小鼠模型.该模型为深入研究Ankle2基因在胚胎发育和衰老发生等中的调控功能提供材料和思路.