基于Cre/LoxP系统的Smad2条件基因打靶小鼠的建立

摘要

Smads家族是转化生长因子TGF-β信号转导途径中一个重要的新基因家族.SMAD2属于受体激活的SMADs.Smad2基因在多种肿瘤中发生突变，是一种可能的肿瘤抑制基因.Smad2基因完全剔除导致小鼠在胚胎期E6.5 d死亡.为了研究Smad2在脊椎动物成体各组织器官及肿瘤发生中的可能作用，利用Cre/LoxP系统构建了Smad2条件基因打靶载体，将两个方向相同的LoxP序列置于Smad2基因组序列C端功能域两侧的内含子中，并在组成型表达Cre重组酶的大肠杆菌中检测了LoxP位点的功能；将打靶载体电击转染小鼠胚胎干细胞，经Southern杂交筛选到3株发生正确同源重组的中靶ES细胞克隆；通过囊胚显微注射将中靶ES细胞注射到受体小鼠囊胚腔，获得了ES细胞种系嵌合体；对高嵌合度小鼠与C57BL/6J交配后的子代小鼠进行基因型鉴定，成功地获得了Smad2条件基因打靶小鼠.