Cre-loxPシステムを用いたミニサークル DNAベクター調製 法の開発

摘要

我々は、これまでに Cre-loxP システムをベースとし て、ゲノム上の特定部位に目的遺伝子を複数導入する ことが可能な逐次遺伝子組込みシステム (AGIS) を開 発している。AGIS を用いて、組換え抗体遺伝子発現 ユニットを特定の細胞ゲノム配列に複数逐次組込むこ とで、高生産 CHO 細胞株の構築に成功している[1] 。 この際、ドナーベクターとして、ミニサークル DNA ベクター（MC）が有効であった。 MC は、バクテリア由来の配列（バックボーン, PB）を取り除き、プラスミドを小型化したベクター である。我々はMC を既存のキットを用いて作製して いたが、煩雑な工程が必要であった。本研究では、よ り簡便で高収率なMC作製方法の確立を目指した。