利用QIAxcel Connect全自动DNA/RNA分析系统鉴定豪猪血蜱和长角血蜱

摘要

豪猪血蜱和长角血蜱携带病原体种类不同,准确对其鉴定是防控相关蜱媒传染病的基础。传统的形态学鉴定需要研究者具有较高的专业水平,且鉴定结果受标本的发育阶段和完整性等因素影响。针对分子标记的PCR扩增和产物测序,能准确鉴定蜱种,但耗时费力。本研究将扩增后的豪猪血蜱和长角血蜱的16S rRNA基因片段,经毛细管凝胶电泳后,两者扩增产物在胶图上出现单一且明显的分离条带,其中长角血蜱基因片段大于豪猪血蜱。两个蜱种的目的基因测序结果显示,长角血蜱455 bp,豪猪血蜱453 bp。将豪猪血蜱和长角血蜱的16S rRNA基因片段扩增产物等量混合,并将两者混合物设为鉴定Size Marker,对长角血蜱16S rRNA基因片段赋值455 bp,对豪猪血蜱的赋值453 bp。经毛细管凝胶电泳分析,豪猪血蜱和长角血蜱分子量被准确测定,且基因条带明显分离。结果表明,采用16S rRNA的PCR扩增和产物毛细管电泳相结合的方法,在产物不测序的情况下,可快速、准确鉴定形态相近的豪猪血蜱和长角血蜱,此外,该法亦可推广到其他2个及以上形态难以鉴定物种的区分。