绿僵菌分解昆虫外壳蛋白酶MAP-21的纯化与特性

摘要

以蝉蜕为底物诱导绿僵菌产生分解昆虫外壳蛋白酶.发酵液经超滤、Ultrogel AcA 54凝胶层析、制备IEF电泳,纯化了一种蛋白酶MAP-21,SDS-PAGE电泳后经银染色呈单带.该酶的Mr为27kD左右,pI为7.6.它的特异识别氨基酸为Arg,其活性可被PMSF和TLCK抑制,表明其活性中心有Ser和His残基.它还可被胰蛋白酶的典型抑制剂Leupeptin、Antipain及STI等所抑制,而胰凝乳蛋白酶抑制剂TPCK和胰凝乳弹性蛋白酶抑制剂FEI对其活性无影响.专一底物和抑制剂特性试验结果表明MAP-21是类胰蛋白酶.此外,该酶还可被EDTA所抑制,表明金属离子为其活性所必需.另外还研究了MAP-21的最适作用温度和pH,以及温度耐受性等特性.